产品描述

MycoBlue Mycoplasma Detector是针对细胞培养液支原体污染快速检测产品，方便快捷，只需要一台水浴锅，就可以快速完成支原体日常检测，不需要使用PCR/qPCR仪，无需电泳，避免了传统巢式 PCR 支原体法检测法易受细胞培养上清中抑制物的影响，产生假阴性结果，以及反应后需开盖电泳检测，增加污染导致的假阳性风险。其检测灵敏度、准确性远远高于 PCR 法。

MycoBlue Mycoplasma Detector可检测多达28种支原体，其中包括细胞培养常见的8种支原体；适用于各种悬浮、贴壁培养细胞，包括CHO、Vero、杂交瘤、Sf9、293等，且具有广泛的培养基兼容性。

产品组分

运输与保存方法

-20°C保存，冰袋运输。  
自备材料

PCR仪或水浴锅。

MycoBlue Mycoplasma Detector可以准确检出28种支原体

*超过95%以上的细胞是被这8种支原体所污染。

注意事项
1）使用本试剂前请仔细阅读说明书。

2）整个实验，应在超净台规范操作，包括反应体系的配制、样本处理及加样。 

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 

实验流程

1. 样本准备

贴壁细胞：直接吸取细胞培养液上清。建议在细胞传代或换液3天以上，并且汇合度达到90%左右时取样，此时上清中支原体含量较高，便于检出。

悬浮细胞：吸取细胞培养液到离心管中，2,300 rpm(500 × g)离心5 min后，吸取上清。建议在细胞传代或换液3天以上时取样，此时支原体含量较高，便于检出。

2. 反应体系

将MycoBlue Buffer从-20°C取出，待解冻后，颠倒混匀，瞬时离心确保所有液体落到管底。根据待检测样品数量，配制如下反应体系:

【注】：1）每次实验通常需要设置阴性对照和阳性对照

2）由于移液器误差，建议每次实验按照样本数+1反应体系准备

用移液器轻轻吹打混匀，分装到PCR管或微量离心管中，每支反应管25μl。

3. 加样

待测样品：向反应管中加入 1 μL 待测培养上清；

阴性对照：第一支反应管中不加入任何样品，或加入1 μl Nuclease-free ddH 2 O作为阴性对照；

阳性对照：向最后一个反应管中加入 1 μL Positive Control，作为阳性对照。

【注】：1）如果反应是在水浴锅中进行，则每管加入 25 μL Paraffin Oil，以防止液体蒸发导致结果的误差。如果反应是在 PCR 仪中进行，无需加矿物油。加入Paraffin Oil时请注意更换枪，以防样本间交叉污染。

2）实验室支原体污染十分常见，鉴于本试剂盒反应灵敏，建议用户在超净台中配制组分并减少反应后开盖次数， 以免出现假阳性结果。

4. 反应条件

加完样后，再在水浴锅或 PCR 仪中，恒温 60°C 孵育 60 min。

【注】：本试剂盒所用酶对温度非常敏感，建议使用 PCR 仪操作；如用水浴锅，应先加热使其达到规定温度后再反应。

5.结果判定

待60 °C 反应 60 min 后，立刻取出反应管，放于室温。在光线良好的环境中观察反应液颜色（建议以白纸为背景）。反应液为天蓝色，则判定为阳性；若反应液为蓝紫色，则判定为阴性。 颜色反应如下图所示。

【注】：

1）反应液颜色若介于天蓝色和蓝紫色之间，可能是由于支原体含量较低，可以将反应时间延长到75-90min。

2）反应管不可开盖，否则会出现空气中支原体污染反应，出现假阳性的现象。