旗赛生物科技（武汉）有限公司
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产品组成
Component | QS-S311-20T | QS-S312-50T | 储存条件 |
染色缓冲液 | 10ml | 25ml | -20℃ 避光保存 |
碘化丙啶染色液(20X) | 0.5ml | 1.25ml | |
RNase A (50X) | 0.2ml | 0.5ml | 4℃ 避光保存 |
产品简介
碘化丙啶(Propidium，简称PI)是一种双链DNA的荧光染料。碘化丙啶和双链DNA结合后可以产生荧光，并且荧光强度和双链 DNA的含量成正比。细胞内的DNA被碘化丙啶染色后，可以用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定，然后根据DNA含量的分布 情况，可以进行细胞周期和细胞凋亡分析。
碘化丙啶染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进 行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。凋亡细胞由于细胞核发生浓缩以及发生DNA片段化(DNA fragmentation)导致部 分基因组DNA片段在染色过程中丢失，因此凋亡细胞碘化丙啶染色后呈现明显的弱染，即荧光强度小于1，在流式检测的荧光图 上出现所谓的sub-G1峰，即凋亡细胞峰。
本试剂盒可应用于培养细胞（悬浮、贴壁）的 DNA 含量（细胞周期）检测。
使用说明
1. 用适当的方法建立检测模型，同时设立阴性对照组，并收集细胞；
2. 根据样本数量，计算所需要的染色工作液体积，每样本 500μl 工作液孵育；临用前将 Rnase A:PI 工作液按 1:9 体积配制成染色工作液。
3. 用 PBS 洗涤细胞一次（离心 2000rpm，5min）收集并调整细胞浓度为 1×106 /ml，取 1ml 单细胞悬液；
4. 制备的单细胞悬液离心后，去除上清，在细胞中加入体积分数为 70％冷乙醇 500ul 固定（2 小时以上或过夜）， 4℃保存，染色前用 PBS 洗去固定液；（如需要，细胞悬液用 200 目筛网过滤一次）；离心洗涤条件可参考 1000rpm，3min；
5. 加入提前配制好的 500μL PI/RNase A 染色工作液，室温避光 30-60min；
6. 上机检测，记录激发波长 488nm 处红色荧光。
【注意事项】
1. 本试剂盒需使用流式细胞仪进行检测。
2. 需自备PBS和70%乙醇。
3. 荧光染料均存在淬灭问题，保存和使用过程中请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
4. 碘化丙啶对人体有刺激性，操作时请小心，并注意适当防护以避免直接接触人体或吸入体内。
5. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
