产品信息：

产品简介：

增强型CCK-8试剂盒（Enhanced Cell Counting Kit-8），简称CCK-8，是一种广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度检测试剂盒。其检测原理在于，在电子耦合试剂存在的情况下，溶液中的WST-8化合物被活细胞内脱氢酶还原成具有水溶性的橙黄色甲臜化合物，该物质在450 nm处有最大吸收峰。甲臜量与活细胞数成正比，即细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。

本试剂盒在常规CCK-8试剂盒基础上进行优化，检测速度更快、灵敏度更高、线性范围更宽。

操作说明：

细胞活力/增殖/毒性检测步骤

1. 在96孔板中接种一定数量生长状态良好的细胞悬液100 µL（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小、细胞增殖速度的快慢等因素决定），于培养箱（37℃，5% CO2）预培养N小时，根据实验需要进行刺激处理。

2.注意同时设置空白孔，即只加入相同体积的培养基和药物，但是不加细胞。

3. 向每孔加入10 µL CCK-8试剂，注意不要在孔中产生气泡，它会影响吸光值。如果孔中有氧化性或还原性药物，可在加CCK-8之前更换新鲜培养基，以去掉药物影响。

4. 将培养板在培养箱内孵育0.5-4小时（孵育时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定，初次实验时可以在0.5、1、1.5、2和4小时后分别用酶标仪检测，然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验）。

5. 用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。

活力计算方法

细胞活力（％）=[OD(实验孔)－OD(空白孔)]／[OD(对照孔)－OD(空白孔)]×100%

细胞抑制率（％）=[OD(对照孔)－OD(实验孔)]／[OD(对照孔)－OD(空白孔)]×100%

其中：

OD（实验孔）：含细胞、CCK-8溶液和药物处理的孔的吸光度

OD（空白孔）：含培养基、CCK-8溶液、药物处理，而没有细胞的孔的吸光度

OD（对照组）：含细胞、CCK-8溶液而没有药物处理的正常孔的吸光度

【注意事项】

1. 避光保存，日常使用可存放于4℃，保质期12个月，长期保存可分装冻存-20℃，保质期24个月，避免反复冻融；

2.细胞接种时注意混匀，避免因初始接种量不同造成结果误差；

3. 培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响；

4. 本试剂盒检测原理是依赖于脱氢酶催化的反应，样品中如有较多还原剂(抗氧化剂)会干扰检测，需设法去除，或者检测前更换新鲜培养基；

5. 使用96孔板进行细胞培养时，需注意水分蒸发而带来的结果误差，建议弃用外围一圈的孔，改加同体积的PBS或细胞培养液，另外，也可将96孔板置于培养箱中靠近水源的地方，以减缓水分蒸发；

6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；

7. 本产品仅供科研使用，不可用于诊断或治疗。