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在原代培养中如何正确选用胶原酶或胰蛋白酶作为消化酶?
解析:胶原酶适于消化纤维性组织、上皮组织以及癌组织等胶原含量高的组织,它对细胞间质有较好的消化作用,可使细胞与胶原成分脱离而不受伤害。该酶分离效果好,即使有钙、镁离子存在仍有活性,故可用 PBS 和含血清的培养液配制,即操作简便又可提高细胞成活率,最终浓度 200u/mL 或 0.1~0.3mg/mL. 此酶消化作用缓和,无需机械振荡,但胶原酶价格较高,大量使用将增加实验成本。
除上述以外的组织可选用胰蛋白酶,胰蛋白酶一般采用的浓度为 0.1%-0.25%(活力 1:200 或 1:250),浓度过高对细胞有毒性。但遇到难消化的组织时,浓度可适当提高,消化时间适当延长,或提升消化温度至 37℃。但需注意在配制时应采用无钙镁离子的 PBS 配制,因为含有钙和镁的盐类溶液会抑制胰蛋白的消化作用。同时消化时间不易过长,控制在20 分钟以内为宜。